ВАШЕ ОПИСАНИЕ
Комфорт по разумной цене!
Наши телефоны:
+7 (962)451-50-90
+7 (906)463-97-74
ВАШЕ ОПИСАНИЕ
Позвонить!
Главная » Статьи » Биохимия и лабораторная диагностика

Диагностикумы на основе очищенных и концентрированных препаратов культурального вируса бешенства

Кузнецова С.В., Сазанова Э.Я., Гринь С.А. Кузнецова Д.П.
Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, г.Щелково, Московской области

Источник: материалы XVI Московского международного конгресса по болезням мелких домашних животных

Быстрый и точный диагноз инфекционных болезней является решающим условием в организации необходимых мер борьбы с ними. Для лабораторной диагностики бешенства используется гистологический метод обнаружения под микроскопом телец Бабеша-Негри в мазках , отпечатках или срезах окрашенных соответствующими красителями.

Метод иммунофлюоресценции (РИФ) основан на взаимодействии специфических рабических антител,меченых флюоресцеин-изоцианом, которые применяются при диагностике бешенства, такие как агглютинация эритроцитов, комплементсвязывания, преципитация.

При естественном и экспериментальном заражении, вирус бешенства индуцирует образованием вируснейтрализующих (ВН), комплементсвязывающих (КС), гемагглютинирующих (ГА) и преципитирующих антител, которые обнаруживаются в реакции вируснейтрализации (РВН), связывания комплемента (РСК), диффузионной преципитации (РДП), торможения гемагглютинации (РТГА) или непрямой (РНГА) гемагглютинации.

При постановке реакции необходимо использовать высокоочищенные компоненты, не дающие побочных неспецифических реакций. В этих целях в настоящее время применяются, как правило,очищенные и концентрированные вирусные препараты. Мы в своей работе использовали вирус бешенства , штамм Щелково -51, репродуцированный в культуре клеток ВНК-21/13.

В своих исследованиях мы применяли концентрированный в 20 раз ПЭГ М-3000 и инактивированные β-пропиолактоном (1:8000) препараты для постановки РСК и РДСК. Исследовали 273 сыворотки крови КРС,вакцинированных антирабической культуральной вакциной из штамма Щелково-51, собак – 67.Сыворотки исследовались через 28-96 дней после иммунизации животных. Из исследованных сывороток крови положительная реакция в РДСК установлена в 72 случаях в титрах 1:2-1:128, что составило 21% исследованных сывороток. ВН-активность определяли в 20 произвольно взятых сыворотках, 7 из которых (т.е.35% имели КС-активность, равную 1:4-!6№”. ВН-активность сывороток в Международных единицах (МЕ) была равна от 0.02 до3.4 МЕ, причем 8 (40%) сывороток имели титры 0.66-3-4 МЕ, а остальные 0.02-0.1 МЕ.

В качестве контроля исследовали 200 сывороток крови 5 видов животных, не подвергавшихся иммунизации: лошадей – 12, КРС – 120. овец – 12, коз – 12, собак -44. Ни в одном случае КС-антител против бешенства не обнаружено

Полученные данные позволяют концентрированный ПЭГ М-3000 культуральный вирус бешенства, штамм Щелково-51, рекомендовать в качестве антигена для постановки РДСК, а реакцию, как серологический метод обнаружения КС-антител в сыворотках крови, привитых животных.

Виру очищенный и концентрированный в 50 раз на геле фосфата алюминия (АLPO4 ) и ультрацентрифугированием испытывался в РНГА для определения уровня антирабических антител в сыворотках животных. Были проведены исследования по обнаружению поствакцинальных антирабических антител РНГА.

Для приготовления антигенного комплекса вирус смешивали с равным объемом отмытых гусиных эритроцитов, затем добавляли 1% р-р Cr Cl и оставляли на 5 мин при комнатной температуре. Сенсибилизированные эритроциты трижды промывали физиологическим р-ром (ФР) и ресуспендировали до концентрации 0.25% в ФР. Реакцию проводили на микротитраторных пластинах. Исследуемые сыворотки инактивировали прогреванием при +560 С в течение 30 мин, а затем адсорбировали равным объемом 1% отмытых эритроцитов для снятия неспецифической реакции. После инкубации 30 мин при +370 С эритроциты осаждали центрифугированием при 2-3 тыс.g. Двукратные разведения сывороток готовили в растворе, состоящем из 0.4% бычьего альбумина, 0.05 М бората натрия и 0.86% NaCl при рН 9.0. К разведениям сыворотки добавляли 0.025 мл сенсибилизированных эритроцитов и выдерживали при +40 С в течение 1 часа после чего проводили учет реакции

В РНГА исследовали сыворотки крови 422 голов КРС, из них 136, вакцинированных антирабической вакциной, и 20 сывороток кроликов.

Сыворотки исследовались в различные сроки после иммунизации животных (28-178 дней).Всего выявлено положительно реагирующих 68 сывороток крови КРС (51%) и все 20 сывороток крови кроликов (100%).

Исследованные 35 произвольно взятых сывороток крови КРС в РН имели титры ВН-антител от 0.01 до 3.4 МЕ. Из них только 16 сывороток имели титры выше 0.5 МЕ (45.7%). Все остальные сыворотки имели титры ВН-активности от 0.46 до менее 0.01 МЕ. Сыворотки крови кроликов в РН имели титры ВН-активности от 2.25 до 27.5 МЕ

Таким образом , РНГА является чувствительным тестом для определения эффективности антирабических вакцин. Полученные данные свидетельствуют о том, что вирус бешенства, репродуцированный в культуре клеток ВНК-21/13 и концентрированный с помощью адсорбции-элюции на (АLPO4 ) и уллтрацентрифугирования, можно рекомендовать в качестве антигена для РНГА, а саму реакцию с использованием этого антигена, как серологический метод для обнаружения ГА-антител в сыворотках крови привитых против бешенства животных.

На базе достижений биологии и биотехнологии возможно создание новых методов для экспресс-диагностики вирусов. Наиболее перспективным является метод иммуноферментного анализа, основанный на применении противовирусных и антивидовых антител, меченых ферментом, которые выявляются различными субстратами.

Summary
Kouznetzova S.V., Sazanova E.Ja., Gren S.A., Kouznetzov D.P. Purification and concentration preparations for diagnostic of virus rabies. VNITIPB, Shelkovo, Moscow reg.

For diagnostic of virus rabies must to use purification and concentration preparations, which no give of secondary reactions.

Категория: Биохимия и лабораторная диагностика | Добавил: timerlan2008 (23.12.2017)
Просмотров: 84 | Теги: Диагностикумы на основе очищенных и | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
avatar

 

                       


ООО "ХИТОН-ЮГ"

О компании
Где купить?
Знак качества
Партнерам
Советы и статьи
Блог
Контакты





Каталог

Защита от блох и клещей
Защита от глистов
Уход за глазами
Уход за ушами
Косметика
Антибактериальные средства
Витаминно-минеральные
комплексы
Другие препараты


Для кошек

 

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы

 

Полезная информация

Клещи у кошек и собак
Пироплазмоз

Для собак

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы











Наши адреса

г. Ставрополь, ул. Старомарьевское шоссе, 28
г. Буденновск, ул. Борцов Революции 215
г. Зеленокумск, ул. Заводская 1А, стр. 18
Контакты

Email: hiton-ug@mail.ru
+7 (962) 451-50-90
+7 (906) 463-97-74 
+7(909) 773-24-06

8Индекс цитирования888 8 Анализ сайта 9Рейтинг@Mail.ru8 Яндекс.Метрика 88New Cell