Официальный сайт Хитон-ЮГ
Как поймать льва в пустыне
Главная » Статьи » Биохимия и лабораторная диагностика

Выявление антител к вирусу инфекционного перитонита кошек (ИПК) иммуноферментным методом

Ю.О. Терехова*, Н.А. Рахманина, М.М. Рахманина, Э.И.Элизбарашвили, В.В Цибезов*, О.А.Верховский*
*АНО «Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных», Москва, Россия,
ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», Москва, Россия

Введение. Возбудителем инфекционного перитонита кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis (FIP)) является РНК-содержащий вирус относящийся к семейству Coronaviridae, роду Coronavirus. Вирус представляет большую группу коронавирусов, включающую также вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС), коронавирус собак (CCV), а также коронавирусы дыхательного тракта человека.

Коронавирусная инфекция у кошек проявляется в двух формах - влажной (инфузионной), сопровождающейся скоплением экссудата в брюшной и/ или плевральной полостях и сухой (неинфузионной) - гранулематоз- ным поражением внутренних, преимущественно паренхиматозных органов и не сопровождается накоплением экссудата в полостях тела. Инфузионный ИПК считается классической клинической формой проявления заболевания на долю которого приходится 75% случаев. Обе формы заболевания приводят к летальному исходу. Наибольшую угрозу ИПК представляет для питомников со скученным содержанием животных, где распространенность инфекции повышается из года в год. Для диагностики ИПК применяются методы детекции как непосредственно возбудителя (ИФА, МФА, ПЦР), так и методы обнаружения специфических антител. Высокие титры антител считаются типичными для генерализованной инфекции и в сочетании с клиническими симптомами ИПК могут быть важным прогностическим показателем, поскольку быстрое увеличение титров антител сопровождается развитием клинических признаков с последующей гибелью животного. ИПК относится к категории «медленных» инфекций. Комплекс «антиген - антитело» в данном случае является потенциальным патологическим агентом, в результате чего повышение уровня антител в сыворотке крови способствует прогрессированию болезни и усугубляет тяжесть клинических проявлений.

Определение уровня антител важно и для выявления интактных животных, что является необходимым при проведении «оздоровления» питомников, осуществлении карантинного контроля, исследовании кошек перед вакцинацией против инфекционного перитонита с использованием живых вакцин.

В нашей стране для определения антител к вирусу ИПК используется в основном реакция непрямой гемаг- глютинации (РНГА). За рубежом для этого широко применяются иммуноферментные тест-системы различных производителей. Целью настоящей работы является разработка иммуноферментного метода (ИФА) определения антител к вирусу ИПК, подтверждение диагностической ценности ИФА и возможности его использования для оценки и прогнозирования клинического состояния кошек при ИПК.

Результаты. На первом этапе работы получены специфические поликлональные антитела к IgG кошки, которые были конъюгированы с пероксидазой хрена. Иммунохимическая активность и специфичность конъюгана определена методом прямого ИФА с использованием в качестве антигенов иммуноглобулинов сыворотки кошки, человека, свиньи и КРС. Коньюгированные антитела применяли в качестве детектирующих антител в непрямом ИФА. Метод основан на взаимодействии иммобилизованного на поверхности лунок планшета антигена вируса ИПК со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к IgG кошки).

В связи с тем, что культивирование и хранение коронавируса кошек представляет определенные трудности, а вирус ИПК имеет тесное антигенное родство с вирусом ТГС, в качестве антигена в ИФА был использован также вирус ТГС. Была проведена очистка вирусов ИПК и ТГС , отработаны условия их сорбции на иммунологический планшет и проведено сравнение иммунохимической специфичности антител к ИПК к вирусам ИПК и ТГС.

В качестве биологического материала использовали сыворотки, асцитную жидкость и /или плевральный экссудат от 124 кошек с подозрением на ИПК. Диагноз подтверждали клиническими или патологоанатомически- ми исследованиями. Все образцы биоматериала были предварительно исследованы на наличие специфических антител методами РНГА и ИФА (Feline Corona Virus antibody ELISA, EVL, Голландия).
Данные исследований показали 100% корреляцию результатов, полученных при использовании в ИФА антигенов вирусов ТГС и ИПК. Это подтверждает возможность использования более доступного антигена вируса ТГС для непрямого ИФА антител к вирусу ИПК.
Чувствительность и специфичность разработанного метода ИФА по сравнению с РНГА составляла 85 и 88%, соответственно; по сравнению с коммерческой иммуноферментной тест-системой Feline Corona Virus antibody ELISA 93 и 95%.

Положительный диагноз ИПК считается установленным при показателях титра антител в ИФА 1:3200 и выше (диагностический титр). Увеличение титра антител при повторном исследовании через 2-4 недели свидетельствует о прогрессировании болезни. Снижение титра в те же сроки не отменяет первоначально поставленного диагноза, но свидетельствует о благоприятном клиническом прогнозе.

Титр 1:800 - 1:1600 свидетельствует о возможной инфицированности кошки как вирусом ИПК, так и эн- теральным коронавирусом кошек или ксеногенными коронавирусами, а также может указывать на латентную форму болезни или носительство; в таком случае результат считается сомнительным. Для уточнения диагноза проводят повторные исследования клинического материала с интервалом 2-4 недели. Увеличение титра антител за этот период свидетельствует о развитии инфекционного процесса, а при достижении уровня 1:3200 или выше при повторном исследовании интерпретируется как ИПК. При сохранении первоначального результата при повторном исследовании или снижении титра диагноз на ИПК считают отрицательным. Титр антител 1:400 считается фоновым.

Для дальнейшего прогнозирования развития инфекции у серопозитивных кошек с титрами выше 1:800, особенно при их скученном содержании, рекомендуется проведение ежемесячных исследований сыворотки крови методом ИФА.

Заключение. Разработана ИФА тест-система для определения титра специфических антител к вирусу ИПК, которая может быть использована в практической ветеринарии для диагностики ИПК, прогнозирования дальнейшего течения болезни и мониторинга уровня антител к вирусу ИПК.

Источник: ТРУДЫ МОСКОВСКОГО МЕЖДУНАРОДНОГО ВЕТЕРИНАРНОГО КОНГРЕССА, 2011 г.

Категория: Биохимия и лабораторная диагностика | Добавил: timerlan2008 (24.12.2017)
Просмотров: 19 | Теги: Выявление антител к вирусу инфекцио | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
avatar

 

Наши торговые марки

 

                       


ООО "ХИТОН-ЮГ"

О компании
Где купить?
Знак качества
Партнерам
Советы и статьи
Блог
Контакты





Каталог

Защита от блох и клещей
Защита от глистов
Уход за глазами
Уход за ушами
Косметика
Антибактериальные средства
Витаминно-минеральные
комплексы
Другие препараты


Для кошек

 

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы

 

Полезная информация

Клещи у кошек и собак
Пироплазмоз

Для собак

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы









Хитон-Юг © 2018 Все права защищены. г. Ставрополь, ул. Старомарьевское шоссе 28

8Индекс цитирования888 8 Анализ сайта 9Рейтинг@Mail.ru8 Яндекс.Метрика 88New Cell