Официальный сайт Хитон-ЮГ
Как поймать льва в пустыне
Главная » Статьи » Инфекционные заболевания

Изучение и оптимизация условий выделения возбудителя парвовирусного энтерита собак

Галкина Т.С., Глобенко Л.А.
ФГУ “Федеральный центр охраны здоровья животных” (ФГУ ВНИИЗЖ) г.Владимир

Источник: материалы Московского международного ветеринарного конгресса

Парвовирусный энтерит собак (ПВЭСоб) – широко распространенное и контагиозное заболевание собак (преимущественно молодняка в возрасте от 1,5 месяцев до 1 года), с высокой летальностью (до 100%).

По данным литературы, парвовирусный антиген обнаруживают в языке (96,3%), глотке (81%), пищеводе (50%), в слизистой оболочке кишечника (85,2%), в костном мозге (81,6%), селезенке (79,7%), тимусе (66,7%), мезентериальных лимфоузлах (60,4%), миндалинах (58,5%). Проводились исследования на чувствительность к парвовирусу собак различных первичных (фибробласты эмбрионов кур и перепелов, почек котят, собак, крольчат, тестикул быка, селезенки кошки) и перевиваемых культур клеток (MDBK- почки быка, MV- легкого норки, 2 клеточные линии почек собак А-72 и MDCK, FK-91, CrFK).

Высокие титры гемагглютининов регистрировались в инфицированных перевиваемых культурах клеток FK-91 (1:4096-1:16384), MDCK (1:128-1:8192) и первичных культурах клеток почек котят, более низкие (1:128-1:512) – в первичных культурах клеток селезенки кошки и почек собак (Сюрин В.Н. и др.1998г., Рахманина М.М. и др. 1992г., Дурыманов А.Г. и др.1996г.).

В нашу задачу входило выделить парвовирусный антиген из патологического материала от больных и подозреваемых по заболеванию парвовирусным энтеритом щенков и подобрать наиболее оптимальную клеточную культуру для репродукции вируса и дальнейших научных исследований.

От бездомных щенков в возрасте 1,5-3 месяцев подозреваемвых по заболеванию ПВЭСоб нами были взяты пробы кала, а от павших и вынужденно убитых пробы кишечника с содержимым, языка, сердца, печени, селезенки. Отобранные пробы исследовали на наличие вируса в ИФА с помощью “Набора для выявления антигенов парвовирусного энтерита собак, вирусного энтерита норок и панлейкопении кошек иммуноферментным анализом” производства НПО “Нарвак”, в соответствии с инструкцией по применению, и в РГА с эритроцитами свиньи. Для выделения парвовируса собак из патологического материала и наработки вируса использовали первичнотрипсинизированные культуры клеток: ПК (почки котенка), ПЩ (почки щенка), СК (селезенки котенка) и перевиваемые линии клеток: MDCK (почки собаки), CrFK (почки котенка), FS (селезенки котенка).

Для анализа из проб (кала, кишечника, содержимого кишечника, языка, сердца, селезенки, печени) готовили 10%-ную суспензию на фосфатно-буферном растворе с pH 6,6 и центрифугировали в течение 15 мин при 1500-2000 об/мин. Надосадок исследовали на наличие вируса в ИФА и РГА.

Результаты ИФА учитывали визуально: лунки с исследуемыми образцами, в которых присутствовал специфический антиген, имели характерное окрашивание (сине-голубое). Реакцию считали положительной, когда была заметна четкая разница в интенсивности окрашивания опытных и контрольных лунок планшета.

Положительные в ИФА пробы исследовали в РГА, титры гемагглютининов составляли 1:128 - 1:32768. Отрицательные в ИФА пробы в РГА не агглютинировали эритроциты (табл.1).

Таблица 1. Результаты выделения парвовирусного энтерита из биоматериала от больных и подозреваемых по заболеванию щенков.

Биоматериал (10% суспензия):

Активность вируса в:

 

ИФА

РГА

Язык

+

1:128 – 1:1024

Сердце

-

-

Печень

-

-

Селезенка

-

-

Кишечник

+

1:1024 – 1:32768

Содержимое кишечника

-

-

Проба фекалия

+

1:128 – 1:8192

Примечание: “+” – положительная реакция, “-” – отрицательная реакция.

Из данных, представленных в таблице 1 видно, что наибольшая концентрация вируса ПВЭСоб отмечается в ИФА в пробах, приготовленых из языка, кишечника, кала, активность которого в РГА с эритроцитами свиньи составляла 1:128 – 1:32768.

Для выделения вируса на культуре клеток использовали первичнотрипсинизированные культуры клеток - ПК, ПЩ, СК и перевиваемые культуры клеток - MDCK, CrFK, FS. Чувствительность данных культур к вирусу определяли по уровню накопления в них гемагглютининов в процессе последовательных 3-х и более пассажей (табл. 2).

Таблица 2. Чувствительность первичных и перевиваемых культур клеток к выделенным изолятам парвовируса собак (по данным РГА).

Культуры клеток

Активность вируса в РГА

ПЩ

1:16 -1:128

ПК

1:64 -1:512

СК

1:64 -1:1024

MDCK

1:32–1:128

CrFK

1:128–1:4096

FS

1:128–1:8192

Как видно из таблицы 2, наибольшее накопление гемагглютининов происходило в первичнотрипсинизированых культурах клеток СК (1:64-1:1024) и ПК (1:64-1:512), а в перевиваемых клетках в CrFK (1:128 – 1:4096) и FS (1:128 – 1:8192).

Установлено, что наибольшая активность вируса ПВЭСоб по данным ИФА и РГА используемых для тестирования возбудителя, отмечается в пробах приготовленных из языка, кишечника и кала. По результатом проведенных опытов можно сказать, что для выделения парвовируса собак из патологического материала можно использовать как первичные культуры клеток (СК и ПК), так и перевиваемые культуры клеток (CrFK и FS), однако наиболее перспективными культурами для репродукции парвовируса собак на наш взгляд, являются перевиваемые культуры клеток CrFK и FS.

Проведенные исследования показали высокую чувствительность и специфичность ИФА и РГА к парвовирусу собак. Данные реакции могут быть использованы практикующими ветеринарными врачами для постановки диагноза ПВЭСоб в условиях ветеринарных клиник с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.

Summary
Galkina T.S., Globenko L.A.: Study and optimization of conditions for isolation of canine parvovirus enteritis agent. FGI “Federal Centre for Animal Health” (FGI “ARRIAH”), Vladimir, Russia.

Data on the isolation of canine parvovirus enteritis agent from stray dog puppies and study of primarily trypsinized and continuous cell cultures for their sensitivity to the agent aimed at the disease diagnosis optimization are given in the paper.

Категория: Инфекционные заболевания | Добавил: timerlan2008 (10.09.2017)
Просмотров: 20 | Теги: Болезни домашних животных, Изучение и оптимизация условий выде, инфекционные заболевания, ВЕТЕРИНАРНАЯ | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
avatar

 

Наши торговые марки

 

                       


ООО "ХИТОН-ЮГ"

О компании
Где купить?
Знак качества
Партнерам
Советы и статьи
Блог
Контакты





Каталог

Защита от блох и клещей
Защита от глистов
Уход за глазами
Уход за ушами
Косметика
Антибактериальные средства
Витаминно-минеральные
комплексы
Другие препараты


Для кошек

 

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы

 

Полезная информация

Клещи у кошек и собак
Пироплазмоз

Для собак

Шампуни
Средства от блох и клещей
Средства от глистов
Витамины и минералы









Хитон-Юг © 2017 Все права защищены. г. Ставрополь, ул. Старомарьевское шоссе 28

8Индекс цитирования888 8 Анализ сайта 9Рейтинг@Mail.ru8 Яндекс.Метрика 88New Cell